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在分子生物學和蛋白質研究中，免疫共沉淀(Co-IP)和免疫沉淀(IP)實驗是探索蛋白質相互作用、驗證靶蛋白結合關系的關鍵技術。無論是研究信號通路、蛋白復合物，還是疾病相關蛋白網絡，IP/Co-IP都能提供直接的實驗證據，幫助科學家深入解析生命活動的分子機制。本期內容將系統梳理IP/Co-IP實驗的詳細步驟以及如何分析實驗結果。一、實驗原理免疫沉淀/免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質的方法。在免疫沉淀中，通過特定抗體與目標蛋白結合，形成抗體—抗原復合...

WB實驗即蛋白質印跡法，是分子生物學、生物化學等領域常用的實驗技術。它依據抗原抗體的特異性結合原理，能對樣品中的特定蛋白質進行定性或半定量分析。WB實驗憑借高特異性和靈敏度，在蛋白質表達水平研究、蛋白質分子大小鑒定、疾病標志物檢測等方面發揮著重要作用，是生命科學研究中不ke或缺的有力工具。實驗原理WB實驗基于抗原-抗體的特異性結合反應，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質，將其轉移至固相載體(如PVDF膜)，再利用特異性一抗和酶標記二抗進行檢測，最終通過化學發光或顯色反應實現目標...

IP/COIP常見問題1、設置實驗對照陽性對照：input,即裂解后的上清，判斷目的蛋白是否表達。陰性對照：和ip抗體同型的IgG。2、抗體、樣本、beads的加入順序①抗體先與蛋白結合，再加入beads;②抗體先與beads孵育，最后加入蛋白；③抗體、樣本和beads同時加入。一般情況下①和②相差不大，如果蛋白量過高，比如大于1000ug,建議使用第二種，否則蛋白容易吸附在磁珠上，降低得率。3、beads磁珠和瓊脂糖珠如何選擇瓊脂糖珠：需要離心，操作繁瑣；吸走上清時容易吸走...

DAB顯色試劑盒是一種基于辣根過氧化物酶(HRP)催化反應的顯色試劑盒，廣泛應用于免疫組化、原位雜交、WesternBlotting、SouthernBlotting、NorthernBlotting及EMSA等實驗中，用于檢測HRP標記的抗體或探針結合的靶標。DAB顯色試劑盒操作步驟(以組織切片為例)樣本準備：組織切片經抗原修復、封閉后，與HRP標記的抗體孵育。洗滌：用TBS或PBS洗滌3-5次，每次3-5分鐘，去除未結合抗體。配制DAB工作液：按比例混合A液(濃縮DAB)...

全機型通用熒光定量試劑從試劑配方優化、預混設計以及廣泛的儀器兼容性等多方面著手，有效提升了PCR實驗的效率，為科研工作者和實驗人員節省了寶貴的時間，推動了相關研究和檢測工作的快速進展。優化試劑配方，加快反應進程部分全機型通用熒光定量試劑通過定向優化擴增酶性能，能夠顯著縮短退火延伸時間。以某款試劑為例，在原有技術基礎上，其45個擴增循環時間可縮短至20-30分鐘，時間節省50%以上。同時，一些試劑采用了抗體修飾的AntiTaqDNA聚合酶，配合qPCRBuffer體系，不僅確保...

無縫克隆試劑盒基于同源重組原理，通過插入片段與線性化載體末端的同源序列(15-25bp)實現定向重組，無需酶切與連接步驟，具有操作便捷、陽性率高(可達95%以上)、支持多片段重組等優勢。無縫克隆試劑盒其使用流程可分為以下三個核心步驟：一、線性化載體制備酶切法雙酶切：選擇載體中兩個不同的酶切位點，用限制性內切酶消化載體，通過凝膠電泳分離并回收線性化載體。雙酶切可降低載體自連背景，提高陽性率。單酶切：若無可選雙酶切位點，可采用單酶切，但需延長酶切時間(2小時至過夜)并進行脫磷處理...

在現代生命科學研究中，綠色熒光蛋白（GFP）因其熒光特性，成為觀察生物分子動態的“可視化標簽”。而GFP瓊脂糖作為將GFP抗體與瓊脂糖凝膠結合的親和介質，正以其高效特異性，在蛋白質純化、互作分析等領域展現出不可替代的實驗價值。GFP瓊脂糖的核心優勢在于靶向捕獲能力。當含GFP標簽的重組蛋白混合液流過瓊脂糖柱時，凝膠基質上的GFP抗體可精準識別并結合目標蛋白，通過洗滌去除雜蛋白后，僅需改變緩沖液pH值即可實現高效洗脫。這種“一站式”純化流程不僅將傳統方法的多步操作簡化為柱層析步...

隨著分子生物學技術的不斷發展，預染蛋白Marker在蛋白質分析、分離和鑒定中扮演著越來越重要的角色。預染蛋白Marker是指那些已經通過染料標記的標準蛋白質，在凝膠電泳中用于分子量標定。與傳統的未染色Marker相比，它不僅具有便于觀察的可視化優勢，還在多種實驗應用中提供了更高的效率和可靠性。工作原理預染蛋白Marker的基本原理是通過化學染料與蛋白質結合，使得Marker蛋白在凝膠電泳過程中能夠被染色并在紫外光下可見。這些蛋白質通常具有已知的分子量和穩定的遷移率，因此它們被...